細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境主要要求：無菌無毒。

創(chuàng)造局部無菌最簡(jiǎn)便的方法：使用超凈工作臺(tái)或生物安全柜。

細(xì)胞無菌室要求：

①密封的房間、有空調(diào)過濾機(jī)組和通風(fēng)系統(tǒng)

②有更衣室、風(fēng)淋室、緩沖間

③無菌室使用前后需經(jīng)過紫外燈輻照30分鐘消毒殺菌

④人員、物品進(jìn)入無菌室也需相應(yīng)的消毒處理

根據(jù)空氣潔凈度不同，無菌室分為百級(jí)、千級(jí)、萬級(jí)、十萬級(jí)和三十萬級(jí)。根據(jù)2010版GMP規(guī)定，無菌室分為A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)、D級(jí)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中常用設(shè)備：

電子天平

結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，稱量的原理和秤原理是一樣的，和秤不同的是，電子天平量程小，精準(zhǔn)度高。

PH計(jì)

結(jié)構(gòu)由機(jī)體和電極筆構(gòu)成；電極筆內(nèi)部參比液是3mol/L的氯化鉀，保護(hù)液是飽和氯化鉀溶液。

純水機(jī)

由過濾柱、反滲透膜、數(shù)顯控制板組成，純水機(jī)可制得蒸餾水和超純水。

高溫高壓滅菌鍋

滅菌原理：密閉環(huán)境，加熱產(chǎn)生水蒸汽，鍋內(nèi)冷空氣經(jīng)排氣閥排出后，關(guān)閉排氣閥，由于水蒸汽無法排出，鍋內(nèi)壓力增加，沸點(diǎn)升高，形成高溫環(huán)境，菌體蛋白質(zhì)變性，從而達(dá)到滅菌的效果。

二氧化碳培養(yǎng)箱

結(jié)構(gòu)：與普通生化培養(yǎng)箱相比，增加了密封性，通入CO2氣體。CO2氣體由外接氣瓶連接。

注意事項(xiàng)：

①氣瓶上有兩個(gè)氣壓表，右邊氣壓表是指氣瓶?jī)?nèi)壓力，左邊氣壓表是進(jìn)入到培養(yǎng)箱內(nèi)氣壓。

②培養(yǎng)箱參數(shù)是設(shè)置好的，分別是37℃，5%CO2。

③培養(yǎng)箱內(nèi)有飽和硫酸銅溶液水盆，應(yīng)定期加入無菌水，定期更換飽和硫酸銅溶液。

倒置顯微鏡

結(jié)構(gòu)：倒置顯微鏡與普通的光學(xué)顯微鏡在結(jié)構(gòu)上相反，光圈在上面，物鏡在載物臺(tái)下面。

使用步驟：

①打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)光圈亮度

②避開物鏡用酒精棉球擦拭載物臺(tái)

③培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿可以直接放在載物臺(tái)上觀察細(xì)胞

④使用結(jié)束后，光圈調(diào)至最暗，關(guān)上電源，蓋上防塵布。

超凈工作臺(tái)

超凈工作臺(tái)僅適于制備培養(yǎng)基和其他無菌試劑及培養(yǎng)非靈長(zhǎng)類細(xì)胞

根據(jù)氣流方向分為水平流超凈工作臺(tái)和垂直流超凈工作臺(tái)，我們實(shí)驗(yàn)室使用的超凈工作臺(tái)是垂直流超凈工作臺(tái)。

生物安全柜

根據(jù)氣流方向和排風(fēng)系統(tǒng)分為三級(jí)生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室使用的是2級(jí)生物安全柜。

生物安全柜和超凈工作臺(tái)的區(qū)別：

生物安全柜能夠完全保護(hù)工作人員、樣品并防止交叉污染的發(fā)生；

超凈工作臺(tái)只是保護(hù)操作對(duì)象而不保護(hù)工作人員和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的潔凈工作臺(tái)。

液氮罐

液氮罐一般分為液氮貯存罐和液氮運(yùn)輸罐。

主要用于低溫貯藏細(xì)胞和菌株凍存管，液氮溫度低至-196℃，使用過程需做好防護(hù)措施。

超低溫冰箱

本實(shí)驗(yàn)室超低溫冰箱主要用于細(xì)胞、菌株凍存及短期保藏，設(shè)置溫度為-80℃，高溫報(bào)警溫度為-73℃，低溫報(bào)警溫度為-85℃。