1.無(wú)氧水的配制

煮沸除氧：將100mL水在燒杯中加熱煮沸約15分鐘，利用持續(xù)加熱沸騰除去部分氧氣，將煮沸后的50mL水趁熱倒入至預(yù)置換氮?dú)夂蟮?20mL厭氧瓶中，蓋緊橡膠塞，換氣除氧：抽真空，換氮?dú)猓磸?fù)3次；如果沒(méi)有真空裝置，可趁熱通氮?dú)?5分鐘，蓋緊橡膠塞，加鋁蓋；或滅菌后趁熱再通氮?dú)?5分鐘；這一步驟是為了進(jìn)一步除氧，利用氮?dú)庵脫Q出殘留的氧氣；滅菌備用：將配制好的無(wú)氧水進(jìn)行常規(guī)濕熱滅菌20分鐘。

2. 無(wú)氧溶液的配制原則

假如該化學(xué)品耐高溫，可先將化學(xué)品稱于厭氧瓶中，然后按無(wú)氧水的配制方法配制無(wú)氧溶液。

假如該化學(xué)品不耐高溫（或耐高溫），可將該化學(xué)品稱量后轉(zhuǎn)移入?yún)捬跏痔紫渲校胖眠^(guò)夜，將該化學(xué)品溶解于事先配制好的無(wú)氧水中，再過(guò)濾除菌。

3.厭氧微生物生長(zhǎng)所需的維生素和微量元素

以上介紹的無(wú)氧水和無(wú)氧溶液配制方法適用于維生素和微量元素溶液的配制。以安全和不破壞化學(xué)物質(zhì)為原則，根據(jù)化學(xué)性質(zhì)選擇最佳配制方法。

Widdel 和 Bak論文提供了厭氧微生物所需的維生素和微量元素（簡(jiǎn)稱Widdel溶液）的配方。下列圖片為該文獻(xiàn)的掃描件，請(qǐng)引用該文獻(xiàn)。

Nonchelated trace element mixture contains: HCl 100 mM, FeSO4 7.5 mM, H3BO3 0.5 mM, MnCl2 0.5 mM, CoCl2 0.8 mM, NiCl2 0.1 mM, CuCl2 0.01 mM, ZnSO4 0.5 mM, Na2MoO4 0.15 mM.

Selenite-Tungstate solution contains: NaOH 10 mM, Na2SeO3 0.02 mM, Na2WO4 0.02 mM.

Vitamin mixture contains: Sodium phosphate buffer (pH 7.1, 10 mM) 100 mL, 4-Aminobenzoic acid 4 mg, D(+)-Biotin 1 mg, Nicotinic acid 10 mg, Calcium D(+)-pantothenate 5 mg, Pyridoxine dihydrochloride 15 mg.

Thiamine solution contains: sodium phosphate buffer(pH 3.4, 25 mM) 100 mL, thiamine chloride 10 mg.

Vitamin B12 solution contains: H2O 100 mL, cyanocobalamine 5 mg.

 4. 厭氧微生物培養(yǎng)基的配制

先配制厭氧基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有0.58 mM K2HPO4, 0.42 mM KH2PO4, 0.1 mM NH4Cl；

將上述混合液滅菌并冷卻至室溫；

 分別配制單獨(dú)的厭氧母液NaHCO3和CaCl2，滅菌并冷卻至室溫；加入到厭氧基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，至終濃度10 mM NaHCO3, 0.25 mM CaCl2；

下列5種Widdle溶液按終體積百分比加入?yún)捬趸A(chǔ)培養(yǎng)基中：0.1%(v/v) Nonchelated trace element mixture, 0.05%(v/v) Selenite-Tunstate solution, 0.1%(v/v) Vitamin mixture, 0.1%(v/v) Thiamine solution, 0.1%(v/v) Vitamin B12 solution；

配制所研究的厭氧菌所需的碳源、電子供體、電子受體、還原劑、和酵母粉等的厭氧母液。

分別加入不同的電子供體、電子受體、碳源等配制成適用于不同生理?xiàng)l件的厭氧微生物生長(zhǎng)：以乳酸、硝酸鹽、硫酸鹽為例

硝酸鹽還原菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源和電子供體, 20 mM NaNO3為電子受體；

發(fā)酵性細(xì)菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源，2.5mM Cysteine hydrochloride為還原劑，0.5g/L Yeast Extract；

硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基：20 mM Sodium lactate為碳源，20 mM Na2SO4為電子受體, 2.5mM Cysteine hydrochloride為還原劑，0.5g/L Yeast Extract

注意要點(diǎn) 

以上實(shí)驗(yàn)均應(yīng)該在嚴(yán)格厭氧操作條件下完成 。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基、碳源、電子受體供體等均可根據(jù)不同的環(huán)境條件和生理菌群加以改變。

上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方組分僅供參考，可能不適用于你所研究的特定微生物種。