小鼠畸胎瘤細胞(P19)介紹：加拿大渥太華大學的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的,是一種能夠在體外培養的多能干細胞, P19 細胞團經RA 誘導可分化成神經元、膠質細胞和纖維母細胞; 而經二甲基亞砜(DM SO ) 誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19 細胞向神經元分化的過程中，神經發育相關基因的表達模式基本模擬了正常小鼠神經發育過程, 因此, P19 目前被用作一個研究神經發育的體外模型。P19 細胞作為研究神經分化機制的模型, 顯著區別于其他細胞系的四大特點是: ①它具有正常小鼠的二倍體核型, 細胞分裂快, 可在體外迅速大量擴增, 多次傳代也不喪失其分化能力。②P19 細胞具有多種分化潛力, 不同誘導條件下可定向分化成不同類型的細胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細胞。③根據P19 細胞誘導分化分階段進行的特點, 能將神經分化的早期機制與參與突起延伸的機制分開研究。④該細胞易于轉染, 且轉染后仍能正常分化, 適于進行細胞基因研究。通過轉染正?；蛲蛔兊哪康幕?span lang="EN-US">, 增強或抑制它們的表達水平可用于研究這些基因在神經分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內源蛋白的表達, 可用來觀察這些蛋白在神經分化中的作用。(references:1.張金平等. 全反式維甲酸體外誘導P19 細胞向心肌方向分化.[J]中國組織化學與細胞化學雜志.2012.1

2.梅宇欽等. 建立經優化的促P19 鼠胚胎癌細胞神經分化模型.浙江大學學報（醫學版）2012.04)

小鼠畸胎瘤細胞(P19)特性：

1） 來源：胚胎；畸胎癌

2） 形態：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

小鼠畸胎瘤細胞(P19)用途：僅供科研使用。

小鼠畸胎瘤細胞(P19)培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備MEMα培養基(MEMα+培養基(GIBCO,貨號11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇43.2mg/L, 葉酸8.82mg/L,β-巰基乙醇7.8mg/L)，90%；BCS，7.5%；胎牛血清，2.5%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM 條件下離心4 分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO 后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。