細(xì)胞介紹
來源于中山醫(yī)院， 用人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H 接種裸鼠， 進(jìn)行3 次肺轉(zhuǎn)移篩選， 取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮下接種后高度自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞系
細(xì)胞特性
12） 1）來源： 肝癌
2）形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣
3）含量：＞ 1 x106 個／ml
4）污染： 支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
S） 規(guī)格： T25 瓶或者 1ml 凍存管包裝
運輸和保存： 可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運輸， 收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇：（2）存活細(xì)
胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途： 僅供科研使用。細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備 DM EM 培養(yǎng)基｛DM EM / F-1 2, GIBCO，貨號12400024 ，添加NaHC0 3 2.0g/L),
85%： 馬血清， 10 %； 胎牛血清， 5%。
2）培養(yǎng)條件 ： 氣相： 空氣， 95%； 二氧化碳， 5%。 溫度： 37 攝氏度， 培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3）凍存液： 90%完全培養(yǎng)基， 10 %DM SO， 現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1 復(fù)蘇細(xì)胞： 將含有1ml 細(xì)胞懸液的凍存管在37 °C 水浴中迅速搖晃解凍， 加 入 4ml 培養(yǎng)基混合均勻。在1000 RPM 條件下離心4 分鐘， 棄去上清液， 補 加 1-2ml 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（ 或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm 皿中， 加入約8ml 培養(yǎng)基， 培養(yǎng)過夜〉。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代： 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%， 即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清， 用不含鈣、鎮(zhèn)離子的PBS 潤洗細(xì)胞1-2 次。
2. 加 2m l 消化液（0.25%Trypsin-0. 53m M EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘， 然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況， 若細(xì)胞大部分變圓并脫落， 迅速拿回操作臺， 輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8m l/ 瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘， 棄去上清液， 補加1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1: 2 到 1: 5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞， 傳代可參考以下方法：
方法一： 收集細(xì)胞， 1000RPM 條件下離心 4 分鐘， 棄去上清液， 補加1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻， 將細(xì)胞懸液按1: 2 到 1: 5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二： 可選擇半數(shù)換液方式， 棄去半數(shù)培養(yǎng)基后， 將剩余細(xì)胞懸起， 將細(xì)胞懸液按1: 2 到 1: 3 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存： 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時， 可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時， 棄去培養(yǎng)基后加入少量膜酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中， 再添加 10%DMSO 后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時， 應(yīng)將細(xì)胞收集， 1000RPM 條件下離心 4 分鐘， 少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走，〉加入部分新鮮培養(yǎng)基， 加入到凍存管中， 在凍存管中加入10%DMSO 后進(jìn)行凍存。
注意事項2
1. 收到細(xì)胞后， 若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、i去存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染， 請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性， 必須在二級生物安全臺內(nèi)操作， 并請注
