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人原代小腸平滑肌細胞
人原代小腸平滑肌細胞
規格:
貨期:
編號:MZ-3554
品牌:Mingzhoubio

活化細胞
凍存細胞
熒光標記細胞

規格:
T25瓶
凍存管

產品名稱 人原代小腸平滑肌細胞
商品貨號 MZ-3554
組織來源 正常人小腸組織
規格 5×105cells/T25培養瓶
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
培養基 DMEM高糖培養基,含FBS、平滑肌細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(建議購買人原代小腸平滑肌細胞專用培養基)
細胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
細胞描述 小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連。小腸與心互為表里。是食物消化吸收的主要場所,盤曲于腹腔內,上連胃幽門,下接盲腸,全長約5-6米,張開有半個籃球大,分為十二指腸、空腸和回腸三部分。其管壁由黏膜,黏膜下層,肌層和漿膜構成。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤,是小腸結締組織惡性腫瘤中最常見的一種。因此,體外小腸平滑肌細胞的培養對研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎和前提。細胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性。
細胞傳代步驟 如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟 待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
主要功能 (1) 平滑肌的收縮是負責小腸蠕動的動力,推動食物向下運動。 (2) 腸炎時平滑肌肌動蛋白增加可導致肌層的增厚,影響收縮力的產生。 (3) 小腸平滑肌細胞在IL-1beta and TNF-alpha 的刺激下分泌IL-6,IL-6 能顯著 的誘發全身的炎癥反應。
主要病生理變化 (1) 腸炎。 (2) 腸梗阻。 (3) 腸癌。
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